掃描電鏡（SEM）對生物樣品進行低溫成像是一種常見的技術，用于觀察生物樣品在接近其自然狀態下的形貌，減少樣品在電鏡下的損傷和失真。生物樣品由于含水量較高，傳統的SEM成像過程中通常會遭遇樣品表面蒸發、變形或燒蝕等問題。低溫成像可以有效減緩這些問題。下面是如何進行低溫成像的一些關鍵步驟和技術要點：

1. 冷凍準備與樣品制備

快速冷凍（Cryofixation）：樣品需要經過快速冷凍處理，以便在樣品內保持其天然結構。常見的快速冷凍方法包括：液氮冷凍：將生物樣品迅速浸入液氮中（-196°C），達到幾乎瞬時冷凍，防止水分結冰時對細胞結構的損傷。

冷凍噴霧法：在低溫下，通過噴霧冷卻樣品的表面。

高壓冷凍：通過在高壓下進行冷凍（通常高達2000 bar）來防止水分在細胞內部形成冰晶，從而減少細胞結構損傷。

冷凍保存（Cryopreservation）：在冷凍后，樣品可以在低溫下長期保存，避免樣品的自然衰退。需要注意樣品冷凍后是否能夠保持生物活性。

2. 冷凍斷層掃描（Cryo-SEM）

原理：冷凍斷層掃描（Cryo-SEM）是一種結合冷凍和掃描電鏡的技術，用于觀察低溫下的生物樣品。冷凍樣品在低溫下保持其自然狀態，樣品在掃描電鏡下通常會在低溫下維持在液氮溫度附近，避免水分揮發。

設備要求：需要具備專門的低溫樣品室或冷凍舞臺的掃描電鏡。設備通常包含一個低溫樣品臺，樣品臺的溫度可以在-150°C到-180°C之間調節。

3. 真空環境與低溫穩定性

低溫真空環境：SEM使用高真空環境，這可能會導致冷凍樣品中的冰晶升華。為了減少這種影響，可以通過在低溫環境下操作（如液氮溫度下）來降低升華速率，保持樣品的低溫狀態。

低溫電子束影響：在低溫下，電子束的影響可能與常規環境下有所不同。電子束與樣品的相互作用較弱，這有助于避免樣品的熱損傷和其他結構破壞。

4. 樣品涂層（Coating）

低溫下的涂層問題：傳統的SEM成像需要給生物樣品涂上一層金屬導電層（如金或鉑），以避免充電效應。然而，低溫下，金屬涂層可能與樣品的低溫特性相沖突。因此，采用非導電涂層（如碳涂層）或使用低溫穩定的金屬涂層可以避免對低溫下的樣品產生影響。

低溫涂層技術：有些冷凍電鏡設備具備低溫涂層功能，能夠在低溫環境下進行涂層，避免樣品溫度升高。

5. 圖像獲取與分析

圖像清晰度：低溫環境下，樣品表面不會發生水分揮發和形態扭曲，從而獲得更清晰、更細致的結構信息。通常情況下，低溫下的圖像質量較好，能夠保持生物組織的細節和形態特征。

圖像增強：冷凍樣品表面未蒸發的水分有助于更好地觀察樣品的表面結構，尤其是對于一些含水量較高的細胞或組織樣品。冷凍態樣品可以提供更高的分辨率圖像。

6. 冷凍濺射（Cryo-SEM）中的濺射過程

濺射與冷凍：在進行低溫SEM成像時，濺射涂層會用非常細小的金屬顆粒（如鉑）覆蓋樣品表面。由于樣品處于低溫狀態，濺射層的附著力和導電性較好，能有效提高圖像質量。

7. 低溫掃描電鏡應用領域

生物醫學研究：低溫SEM可用于觀察細胞、組織、蛋白質復合物等生物樣品的表面結構。比如，觀察細胞膜的微結構、細胞之間的連接、細胞器等。

病毒研究：研究病毒的形態、結構以及病毒與宿主細胞的相互作用。

納米技術：研究納米粒子或納米材料與生物分子或細胞的相互作用，尤其在低溫環境下，能更真實地反映其生物學效應。

以上就是澤攸科技小編分享的掃描電鏡如何對生物樣品進行低溫成像。更多掃描電鏡產品及價格請咨詢15756003283(微信同號)。